产品储存：－20℃ 保存，有效期12个月
 
制品说明：本制品采用分子进化技术多点突变的新一代反转录酶，大幅度提高了稳定性和反转录效率。5 × TRUE RT MasterMix为一管式反转录预混Mix，含有反转录所需的所有试剂（TRUEscript Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer），只需加入模板RNA和水即可进行反应。使得cDNA的合成更加的方便快捷，特别适合cDNA合成以后的两步法Real Time PCR检测。
适用范围：第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。
产品特点：
1. 新一代反转录酶大幅度提高了稳定性和反转录效率。
2. 全预混的反转录Mix，只需加入RNA和水，15分钟简单快速完成反转录。
3. RNA模板的体积最多可加到总体积的80%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。
4. 预混合Mix在-20℃不冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。 
5. 本产品针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例，也可以采用10μl反应体系)
1. 将模板RNA和5 × TRUE RT MasterMix在冰上解冻；RNase free H2O在室温（15-25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2. 在RNAse free管里面加入以下成分：(建议使用PCR管冰上配制，置PCR仪反应)
Components Volume
Total RNA/mRNA ≤ 16 μl *
5 × TRUE RT MasterMix 4 μl (见注意事项3)
RNase free H2O to 20 μl（补足到总体积20 μl）
* Total RNA不超过2 μg，mRNA不超过200 ng (20μl体系)
3. 移液器轻轻吹打混匀（总体积20 μl）
如使用mRNA模板是来源于真核细胞（如人、小鼠的组织细胞）含有Poly(A)尾结构，42℃孵育15 min。
如使用mRNA模板是来源于原核细胞（细菌）或者病毒等不含Poly(A)尾结构，25℃孵育10 min，42℃孵育15 min。
注意：如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试将反应温度提高至50℃，有助于提高产量。
4. 85℃加热 5 sec 失活TRUEscript Hˉ RTase。
5. 得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应，或在-20℃保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。 


RT-qPCR
取适量反转录cDNA产物（一般不超过qPCR反应体积的1/10）作为qPCR模板，按照厂家荧光定量PCR试剂说明书进行下一步荧光定量PCR。 如果表达基因含量丰富，可以根据实际适当稀释cDNA模板使用。
注意事项:
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 5 × TRUE RT MasterMix 非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。5 × TRUE RT MasterMix内包含的酶均为过量，即使每次按照3.6 μl-3.8 μl使用，也不影响使用效果。