改艮番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜
酸性的骨和酸性染料固绿结合雨呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。番红O是一种结含多阴离子的阳离子染料，其显示软骨是基于于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合。 番红O着色与阴离子的浓度近似成正比 关系,间接反映基质中蛋自多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时软骨中的糖蛋白会释放出来,使基质成分分布不均匀,从而导致番红O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O染色的 软骨基质进行定量分析。固绿与胶原纤维结合，不宜褪色。番红O-固绿染色的分化很关键 ,分化过度易导致切片不着色。分化不足易导致切片着色过深。